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BSA-Alkyne的制備過程是怎樣的

2025-03-02 [10]

以下是一種常見的BSA-Alkyne的制備過程:

活化炔基試劑

選擇合適的炔基試劑,如N-炔丙基馬來酰亞胺(MV 130.12)等,將其溶解在有機(jī)溶劑(如二甲基亞砜,DMSO)中,配制成一定濃度的溶液。

修飾牛血清白蛋白(BSA)

將牛血清白蛋白(BSA)溶解在緩沖溶液(如磷酸鹽緩沖液,PBS)中,調(diào)節(jié)pH值至合適范圍(一般為7.0-8.0)。然后,在攪拌下緩慢滴加活化的炔基試劑溶液,控制反應(yīng)溫度(一般為室溫或4°C)和反應(yīng)時(shí)間(數(shù)小時(shí)至過夜),使炔基與BSA上的特定基團(tuán)(如半胱氨酸殘基)發(fā)生反應(yīng)。

純化產(chǎn)物

反應(yīng)結(jié)束后,通過透析、超濾或凝膠過濾層析等方法去除未反應(yīng)的炔基試劑和其他小分子雜質(zhì),得到純化的BSA-Alkyne產(chǎn)物。

鑒定與分析

采用多種技術(shù)對制備的BSA-Alkyne進(jìn)行鑒定和分析,如SDS-PAGE電泳檢測其分子量和純度,Western blot驗(yàn)證炔基的修飾情況,以及光譜分析(如紫外-可見光譜、熒光光譜)等確定其結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。

儲存

將純化后的BSA-Alkyne產(chǎn)物分裝,儲存在-20°C或更低溫度下,避免反復(fù)凍融,以保持其穩(wěn)定性。

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