CY5 - 根皮苷的合成方法主要有以下兩種:
合成 CY5 活性中間體:通常以對氨基苯磺酸等為起始原料,經(jīng)過重氮化反應、吲哚環(huán)的成環(huán)反應、親核取代反應、縮合反應等多步反應,得到如 1 - 乙基 - 2,3,3 - 三甲基吲哚 - 5 - 磺酸鹽和 1-(ε- 羧戊基)-2,3,3 - 三甲基吲哚 - 5 - 磺酸鹽等 CY5 的關鍵中間體。
制備根皮苷:以柚皮苷為原料,先將其溶解在氫氧化鈉溶液中,加入雷尼鎳催化劑,在室溫及一定氫氣壓力下進行加氫反應,反應液過濾除催化劑后,調 pH 值并保溫,再經(jīng)過濾、水解等步驟得到根皮苷。
偶聯(lián)反應:將 CY5 活性中間體與根皮苷在適當?shù)姆磻獥l件下進行偶聯(lián)反應,通常需要使用縮合劑或催化劑來促進反應的進行,使 CY5 與根皮苷通過共價鍵結合形成 CY5 - 根皮苷。反應結束后,經(jīng)過純化步驟,如柱層析、重結晶等,得到高純度的 CY5 - 根皮苷產(chǎn)品。
構建重組菌株:通過基因工程技術,將編碼與 CY5 合成相關的酶以及根皮苷合成途徑中的關鍵酶的基因導入到合適的宿主細胞中,構建出能夠同時合成 CY5 和根皮苷或其前體物質的重組菌株。
發(fā)酵培養(yǎng):將構建好的重組菌株在適宜的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng),通過優(yōu)化培養(yǎng)條件,如溫度、pH、溶氧等,使菌株大量合成 CY5 和根皮苷或其前體物質。
體內或體外催化合成:在生物體內,利用菌株自身的代謝系統(tǒng)和酶催化機制,使 CY5 和根皮苷或其前體物質在細胞內或細胞外進行自然的偶聯(lián)反應,生成 CY5 - 根皮苷;或者將發(fā)酵培養(yǎng)得到的含有 CY5 和根皮苷或其前體物質的細胞提取物或酶液在體外進行反應,加入必要的輔助因子和底物,通過酶的催化作用合成 CY5 - 根皮苷。
分離純化:發(fā)酵結束后,采用合適的分離純化方法,如萃取、層析、膜分離等,從發(fā)酵液或反應混合物中分離出 CY5 - 根皮苷,并進行進一步的純化和鑒定。
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