如何使用 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 進(jìn)行蛋白質(zhì)標(biāo)記?


名稱
中文名稱:PC生物素-PEG3-NHS酯
英文名稱:PCbiotin-PEG3-NHSester
化合物性質(zhì)
CAS號:2353409-93-3
分子式:C36H52N6O15S
分子量:840.89
外觀:黃色實心
檢測圖譜:1H NMR
儲存條件:-20℃
結(jié)構(gòu)式:
結(jié)構(gòu)和性質(zhì)
PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 是一種功能化的生物素衍生物,它結(jié)合了生物素、聚乙二醇(PEG)鏈和NHS(N-hydroxysuccinimide)碳酸酯酯基團。這種特別的結(jié)構(gòu)使得它在生物分子標(biāo)記和化學(xué)修飾中具有廣泛的應(yīng)用潛力。此外,它還具有光可切割特性,允許在沒有試劑的情況下從streptavidin微球上釋放捕獲的生物分子。
使用 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 進(jìn)行蛋白質(zhì)標(biāo)記的一般步驟如下:
準(zhǔn)備蛋白質(zhì)溶液:將待標(biāo)記的蛋白質(zhì)溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中,確保蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和溶解性。
計算試劑用量:根據(jù)蛋白質(zhì)的濃度和需要的標(biāo)記程度,確定 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 的使用量。通常需要進(jìn)行一些預(yù)實驗來優(yōu)化試劑比例。
反應(yīng):在適當(dāng)?shù)臈l件下,將 PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 加入到蛋白質(zhì)溶液中。該試劑的 NHS 部分會與蛋白質(zhì)上的伯胺基團特異性反應(yīng),形成氨基甲酸酯鍵,從而實現(xiàn)標(biāo)記。反應(yīng)條件可能會因具體實驗要求而有所不同,一般在室溫或稍高的溫度下進(jìn)行一定時間的孵育。
控制反應(yīng)時間:反應(yīng)時間需要根據(jù)實際情況進(jìn)行優(yōu)化,以確保充分標(biāo)記,同時避免過度反應(yīng)導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性或其他不良影響。
終止反應(yīng)(可選):根據(jù)需要,可以通過加入適當(dāng)?shù)拇銣鐒┗蜻M(jìn)行透析等方法來終止反應(yīng)。
純化:標(biāo)記后的蛋白質(zhì)可能需要進(jìn)行純化,以去除未反應(yīng)的試劑和其他雜質(zhì)??梢允褂媚z過濾、透析或其他合適的純化方法。
在整個過程中,需要注意以下幾點:
試劑的保存:PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 對光和溫度敏感,應(yīng)始終保持在低溫干燥、避光的條件下。
緩沖液的選擇:使用適合蛋白質(zhì)穩(wěn)定和反應(yīng)進(jìn)行的緩沖液。
優(yōu)化條件:通過預(yù)實驗優(yōu)化試劑用量、反應(yīng)時間和溫度等條件,以獲得最佳的標(biāo)記效果。
蛋白質(zhì)的質(zhì)量和純度:較高質(zhì)量和純度的蛋白質(zhì)有助于提高標(biāo)記的效率和準(zhǔn)確性。
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